Fluoresceinisothiocyanat ( FITC ) ist ein Fluoresceinderivat mit vielfältigen Anwendungsmöglichkeiten [ 1 , 2 ], unter anderem in der Durchflusszytometrie. FITC wurde erstmals 1942 beschrieben [3 ] und ist das ursprüngliche Fluoresceinmolekül , das mit einer reaktiven Isothiocyanatgruppe (−N=C=S) funktionalisiert ist , welche ein Wasserstoffatom am unteren Ring der Struktur ersetzt. Es ist typischerweise als Isomerengemisch aus Fluorescein -5-isothiocyanat (5-FITC) und Fluorescein-6-isothiocyanat (6-FITC) erhältlich. FITC reagiert mit Nukleophilen, darunter Amin- und Sulfhydrylgruppen von Proteinen . Es wurde 1958 von Robert Seiwald und Joseph Burckhalter synthetisiert [ 4 ].

Eine an den Fluoresceinkern gebundene Succinimidylester- Funktionsgruppe, wodurch "NHS-Fluorescein" entsteht, bildet ein weiteres häufig vorkommendes aminreaktives Derivat, das in Gegenwart anderer Nukleophile eine viel höhere Spezifität gegenüber primären Aminen aufweist.

FITC besitzt Anregungs- und Emissionsspektren mit Peakwellenlängen von etwa 495 nm bzw. 519 nm [ 5 ] , was ihm eine grüne Farbe verleiht. Wie die meisten Fluorochrome neigt es zur Photobleichung . Aufgrund dieses Problems wurden Fluorescein-Derivate wie Alexa 488 und DyLight 488 für verschiedene chemische und biologische Anwendungen entwickelt, die eine höhere Photostabilität , eine höhere Fluoreszenzintensität oder andere Anbindungsgruppen erfordern. Darüber hinaus wird die Photobleichneigung von FITC in einigen Experimenten genutzt, um die laterale Mobilität von Proteinen in Membranen mittels der Fluoreszenz-Recovery-after-Photobleaching-Technik ( FRAP) zu messen [ 6 ] .

Referenzen

  1. ^ The TH; Feltkamp, ​​TE (1970). „Konjugation von Fluoresceinisothiocyanat an Antikörper: I. Experimente zu den Konjugationsbedingungen“ . Immunology . 18 (6): 865–873 . PMC  1455721. PMID  5310665 .
  2. ^ The TH; Feltkamp, ​​TE (1970). „Konjugation von Fluoresceinisothiocyanat an Antikörper: II. Eine reproduzierbare Methode“ . Immunology . 18 ( 6): 875–881 . PMC 1455722. PMID 4913804 .  
  3. ^ Coons AH, Creech HJ, Norman Jones R, Berliner E (1942). „Der Nachweis von Pneumokokken-Antigen in Geweben mittels fluoreszierender Antikörper“ . The Journal of Immunology . 45 (3): 159–170 . doi : 10.4049/jimmunol.45.3.159 . S2CID 255685595 . 
  4. ^ Riggs JL, Seiwald RJ, Burckhalter JH (1958). „Isothiocyanatverbindungen als Fluoreszenzmarkierungsmittel für Immunserum“ . The American Journal of Pathology . 34 (6): 1081–1097 . PMC 1934794. PMID 13583098 .  
  5. ^ "FITC" .
  6. ^ Tsuji, Akihiko; Ohnishi, Shunichi (07.10.1986). „Einschränkung der lateralen Bewegung von Band 3 in der Erythrozytenmembran durch das Zytoskelett: Abhängigkeit vom Spektrin-Assoziationszustand“ . Biochemistry . 25 (20): 6133–6139 . doi : 10.1021/bi00368a045 . ISSN 0006-2960 . PMID 3790510 .